《表1 博落回p6H基因克隆所用引物》

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《博落回p6H基因的表达分析与基因结构分析》

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使用试剂提取博落回总RNA（Tiangen#DP432），RNA含量检测使用Qubit 2.0之后1%凝胶电泳进一步检测所提取RNA的完整性。获得完整的RNA后，使用宝生物（TaKaRa）PrimeScript TMⅡ1 st Strand cDNA Synthesis Kit进行反转录合成cDNA。根据博落回基因组数据设计p6H基因序列扩增引物（表1），以cDNA为模板克隆p6H基因CDS全长。使用宝生物（TaKaRa）Premix Taq试剂（#RR902A），反应体系:Taq Mix聚合酶12.5μL、cDNA模板200 ng、上下游引物各1μL、ddH2O水补足25μL。PCR扩增程序为:95℃10 s，58℃30 s，72℃1 min，32个循环。电泳检测在1%琼脂糖凝胶中进行，将目的片段连接到pMD18-T载体并转入大肠杆菌，过夜培养后挑取菌落PCR并提取质粒送测序。测序显示，p6H基因序列符合博落回基因测序数据（表1）。