《表1 基因克隆所用引物》

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《皱纹盘鲍基质金属蛋白酶基因的克隆与表达分析》

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通过拼接NCBI SRA数据库中皱纹盘鲍转录组测序数据（登录号:SRP059307），得到完整的皱纹盘鲍转录组序列。利用BLAST在线软件预测得到与其他物种MMP同源的Hdh-MMP-16/17/21基因部分序列。用Primer 5.0软件设计Hdh-MMPs特异性引物（见表1），以皱纹盘鲍血淋巴细胞cDNA为模板进行PCR扩增。扩增反应体系（20μL）如下:Taq酶0.2μL，10×buffer 2.0μL，dNTP（10 mmol/L）2.0μL，正向引物（10μmol/L）1.0μL，反向引物（10μmol/L）1.0μL，cDNA1.0μL，ddH2O 12.8μL。PCR扩增条件为:94℃预变性5 min；94℃变性30 s，58℃退火30 s，72℃延伸2 min，循环35次；最后72℃延伸10 min。将3μL扩增产物上样于质量分数1.0%的琼脂糖凝胶，并进行电泳检测。扩增产物经DNA纯化试剂盒（Tiangen）回收后，连接p EASY-T1载体（TransGen Biotech），并进行转化和菌落PCR，挑取阳性菌落送厦门铂瑞生物科技有限公司测序。