《表1 Qt KNI基因研究中采用的引物》

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《白花虎眼万年青QtKN1基因的克隆及功能分析》

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为了研究Qt KNI基因的功能，构建了组成型表达载体植物表达载体。采用同源重组（无缝拼接）方法，先将植物表达载体p UBGFP用XbaⅠ和KpnⅠ双酶切后进行线性化，然后设计用于同源重组的引物XbaⅠKNF和KpnⅠKNR（表1）。该引物的设计是分别在开放阅读框架（open reading frame，ORF）的前后（起始密码子和终止密码子）分别选取20个左右碱基作为基因特异的序列，并在其5&apos；端引入线性化p UBGFP植物表达载体XbaⅠ和KpnⅠ两个酶切位点附件的15~20个碱基及其酶切位点和保护碱基序列；用XbaⅠKNF和KpnⅠKNR为引物，以珠芽c DNA为模板，用高保真酶扩增后得到的PCR产物，将PCR产物和线性化的p UBGFP植物表达载体两者进行重组，然后转化到大肠杆菌中，筛选阳性转化子进行PCR和酶切检测（图7）。