《表1 稻瘟病抗性基因的基因型鉴定结果和采用的引物组合》

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《国外引进水稻种质资源的稻瘟病抗性基因检测与评价》

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R：抗病基因型；S：感病基因型

用SDS抽提法提取水稻基因组DNA[12]。用于PCR扩增的引物相关信息见表1。引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。本研究选取8个稻瘟病抗性基因Pi9、Pi2、Pi5、Pi54、Pikm、Pita、Pia和Pib的引物均为功能性标记。PCR的扩增反应体系总体积为10μL，包括20～100 ng/μL的基因组DNA1μL，2×Power Taq PCR MasterMix（北京百泰克生物技术有限公司）5μL，10μmol/L的上游和下游引物各0.5μL，ddH2O补足至10μL。PCR扩增反应程序为94℃预变性5 mim；94℃变性30 s，退火30 s，72℃延伸，35个循环；72℃终延伸10 min，待降温至16℃即可取出，置于4℃冰箱保存备用。PCR产物在6%非变性聚丙烯酰胺凝胶中电泳分离，4S GelRed核酸染料染色，凝胶成像系统拍照，依据11对功能性标记对应抗性基因片段的大小，参照Marker对扩增条带赋值，判断每份材料8个稻瘟病抗性基因有无。为确保结果准确、可靠，每个样品重复2次以上。