《表1 PCR研究中炎症信号因子基因引物序列》

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《东海海参性腺丙酮提取物的体外功能活性分析》

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采用实时荧光定量PCR方法（quantitative realtime PCR，qRT-PCR）检测Am-GE对RAW264.7细胞TNF-α、IL-1β、IL-6和iNOS mRNA表达的影响。取小鼠肝脏0.1 g，加入150 mL TRIzol，低速匀浆破碎细胞，提取总RNA。取1μg总RNA逆转录成cDNA，之后于25 mL的反应体系中进行PCR扩增，各反应物及用量为：cDNA模版6μL（稀释5倍），Maxima SYBR Green qRT-PCR Master mix 12.5μL，上、下游引物各0.3μL，超纯水5.9μL。反应条件：95℃预变性10 min，95℃变性15 s，60℃退火20 s，72℃延伸30 s，共42个循环，炎症因子基因均以β-actin作为内参校正，将正常不添加LPS和Am-GE的RAW264.7细胞组定为1个单位。如表1所示，各目的基因引物序列使用Primer Premier 6.0设计，由上海生工生物工程有限公司合成。