《表2 本研究中使用的细胞因子基因的荧光定量PCR引物》

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《PRRSV在感染早期通过活化CREB竞争抑制p65与CBP结合》

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用MOI 1 Hu N4-F5与10 ng/m L的h TNF-α混合孵育感染Marc-145细胞，阳性对照为10 ng/m L h TNF-α+2%FBS的DMEM细胞培养基培养的细胞，阴性对照用2%FBS的DMEM细胞培养基培养的细胞，37℃5%CO2培养箱内分别感染1 h或24 h，收集细胞一部分用于提取细胞总RNA，一部分用Pierce IP Lysis Buffer于冰上裂解10 min，12 000 r/min 4℃离心2 min，弃沉淀，在上清中加入抗CBP或CREB MAb（1∶400），4℃过夜孵育，随后在混合液中加入Protein G和Protein A琼脂糖磁珠，室温孵育30 min，用Pierce IP Lysis Buffer对琼脂糖磁珠洗5遍后经SDS-PAGE电泳后转移至硝酸纤维膜上，分别利用抗p-CREB、抗p-p65、抗CBP、抗CREB和抗p65的MAb（1∶1 000）为一抗，以山羊抗兔Ig G-HRP为二抗（1∶5 000）孵育，进行western blot鉴定，分析CO-IP实验结果。将提取的细胞总RNA反转录为cDNA后，利用表2中的引物通过荧光定量PCR方法检测IL-10及IFN-β的转录水平，同时设GAPDH为参照。