《表1 检测内参基因及各免疫因子的荧光定量RT-PCR引物信息》

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《鲫鱼类志贺邻单胞菌的鉴定及其致病机制研究》

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感染10 d后迫杀感染鲫鱼，分别无菌采集对照组（D组）及实验组（A组、B组、C组）脾脏、头肾组织于液氮中快速冷冻，各组织剪取100 mg加入1 m L RNAiso Plus提取总RNA，经1%琼脂糖凝胶电泳及Bio Spec-nano分别检测RNA的完整性和提取质量。利用PrimeScriptTM RT reagent Kit with g DNA Eraser反转录为cDNA，以其为模板，采用荧光定量RT-PCR检测鲫鱼HSP70、IL-8、TLR22基因在脾脏、头肾中的转录水平，以beta-actin作为内参基因，引物详见表1。扩增体系（10μL）均为：模板cDNA 1μL，上、下游引物（10μmol/L）各0.8μL，dd H2O 2.2μL，TB GreenTM Premix Ex TaqTMⅡ5.2μL；扩增程序分别为：95℃3 min；95℃10 s，53.6℃（beta-actin、HSP70）/52.8℃（IL-8、TLR22）20 s，72℃20 s，循环39次；溶解曲线65℃～95℃每5 s增加0.5℃。