《表4 荧光定量引物设计 (以18S为内参) Table 4 Primer design for the RT-PCR amplification (18S as the internal refer

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《瘤背石磺Os-NMHC的克隆、表达分析以及NMHC进化节点探讨》

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利用Quanti Fast?SYBR?Green PCR Kit试剂盒（Qiagen，Germany）在Light Cycler?480Ⅱ型荧光定量PCR仪（Roche，Swiss）进行反应。反应体系:2×Quanti Fast?SYBR?Green PCR Master Mix，5μL；10μmol/L Forward primer，0.2μL（表4）；10μmol/L Reverse primer（表4），0.2μL；c DNA，1μL；Nuclease-free H2O，3.6μL。PCR程序:95℃5 min；95℃10 s，60℃30 s，40个循环。循环结束后利用熔解曲线检测产物特异性:从60℃缓慢升温至97℃，每℃采集5次荧光信号。每种石磺采用3个生物学重复，3个技术重复。采用Roche384孔板加样，适用同一块PCR板保证所有PCR扩增效率一致。