《表1 实时荧光定量PCR的引物序列Tab.1 The primer sequence for the quantitative real-time PCR》

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《通体沉香醇提物对氟尿嘧啶致小鼠肝损伤的保护作用》


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注:ROS:活性氧簇;Keap1:Kelch类ECH相关蛋白1;Nrf2:NF-E2-相关核转录因子2;NADPH:还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸;HO-1:血红素氧合酶-1;GST:谷胱甘肽转移酶;TNF-R:肿瘤坏死因子受体;TRAF6:肿瘤坏死因子受体相关因子6;My D88:髓样分化蛋白抗体8;IKKβ:核因子κb抑制因子;IκB-β

q PCR检测:Nrf2-ARE和NF-κB信号通路中基因(引物序列见表1)。20μl的反应总体积[加入Syber Green预混Taq酶10μl,分别加上、下游稀释后引物各0.5μl,加入c DNA模板5μl(稀释10倍),以焦碳酸二乙酯(diethypyrocarbonate,DEPC)处理过的纯水(DEPC-dd H2O)补足至20μl,混匀],实时上机检测。反应条件:95℃4 min预变性,95℃15 s变性,60℃20 s,72℃40 s退火,连续40个循环,同时收集荧光。反应结束后立即进行融解曲线分析(65~95℃,每次0.5℃、6 s)。由软件自动生成扩增曲线和融解曲线并设定基线。经绘制标准曲线验证,各个产物的扩增效率以目标基因与β-actin扩增产物的2-△△CT比值分析计算各个基因的m RNA表达情况。