《表1 实时荧光定量PCR的引物序列Tab.1 The primer sequence for the quantitative real-time PCR》
注:ROS:活性氧簇;Keap1:Kelch类ECH相关蛋白1;Nrf2:NF-E2-相关核转录因子2;NADPH:还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸;HO-1:血红素氧合酶-1;GST:谷胱甘肽转移酶;TNF-R:肿瘤坏死因子受体;TRAF6:肿瘤坏死因子受体相关因子6;My D88:髓样分化蛋白抗体8;IKKβ:核因子κb抑制因子;IκB-β
q PCR检测:Nrf2-ARE和NF-κB信号通路中基因(引物序列见表1)。20μl的反应总体积[加入Syber Green预混Taq酶10μl,分别加上、下游稀释后引物各0.5μl,加入c DNA模板5μl(稀释10倍),以焦碳酸二乙酯(diethypyrocarbonate,DEPC)处理过的纯水(DEPC-dd H2O)补足至20μl,混匀],实时上机检测。反应条件:95℃4 min预变性,95℃15 s变性,60℃20 s,72℃40 s退火,连续40个循环,同时收集荧光。反应结束后立即进行融解曲线分析(65~95℃,每次0.5℃、6 s)。由软件自动生成扩增曲线和融解曲线并设定基线。经绘制标准曲线验证,各个产物的扩增效率以目标基因与β-actin扩增产物的2-△△CT比值分析计算各个基因的m RNA表达情况。
图表编号 | XD0022244200 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2018.03.30 |
作者 | 王灿红、王帅、彭德乾、余章昕、郭鹏、魏建和 |
绘制单位 | 中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所海南分所海南省南药资源保护与开发重点实验室、中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所、海南医学院药学院、中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所海南分所海南省南药资源保护与开发重点实验室、中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所海南分所海南省南药资源保护与开发重点实验室、中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所、中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所海南分所海南省南药资源保护与开发重点实验室、中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所 |
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