《表1 待测基因引物序列：转基因斑马鱼在镉免疫毒性研究中的应用》

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《转基因斑马鱼在镉免疫毒性研究中的应用》

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根据毒性暴露结果，将0.1μmol·L-1CdCl2溶液加入到10 cm玻璃表面皿中，每孔加入20 mL试液和50枚挑选过的发育良好的杂交斑马鱼鱼卵，在人工气候箱培养6 d后，每暴露组取1个表面皿中所有仔鱼样品作为1个样本，用液氮冷冻，于1.5 mL离心管中-20℃冷冻保存。试验设置空白对照组。总RNA利用Trizol(Invitrogen Life Technologies，Carlsbad，CA，US）方法提取，通过测定OD值和1%的琼脂糖凝胶电泳鉴定RNA的浓度和质量。根据课题组前期研究结果[14]，选择斑马鱼金属硫蛋白相关基因（zMT、dMT）、炎症相关基因（serp、tnf）和癌症相关基因（ccgn1、chk2、p53）作为研究对象，以β-Actin基因为内参，采用Primer 5.0软件设计引物，具体功能与扩增引物序列如表1所示。按照常规方法取3μg上述总RNA反转录成cDNA，利用LightCycle 480(Roche Applied Science）设备及配备的试剂盒（Roche Applied Science）进行实时定量RT-PCR分析。每个样品均设置4个平行，2-ΔΔCT方法计算相对表达量，最终结果用暴露组基因表达量相对空白组基因表达量比例的形式表示。