《表1 引物序列信息:细菌耐药基因在斑马鱼体内转移规律的初步研究》

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《细菌耐药基因在斑马鱼体内转移规律的初步研究》


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注:a表示同源重组引物HR-F和HR-R的序列,划线部分表示clpP基因的上下游同源臂,未划线部分表示扩增氯霉素抗性基因的引物。b表示clpP基因的外侧鉴定引物扩增产物大小,在clpP基因被cat替换以后为1 239 bp,替换之前为882 bp。

针对质粒PKD3的氯霉素抗性基因cat、质粒RP4上的特异性片段traG以及大肠杆菌K12基因组上clpP基因片段,利用Beacon Designer 7软件设计同源臂和引物。在美国国家生物技术信息中心的官网(http://www.ncbi.nlm.nih.gov)上对比并分析引物序列的特异性。为了鉴定同源重组后的产物片段的位置和大小是否正确,在clpP基因两侧的外端还设计了鉴定引物(Df,Dr),它在clpP基因未被替换前的野生型大肠杆菌K12中的序列长度为882 bp,被cat基因替换后,该引物间的序列长度变为1 239 bp。实验使用的所有引物均由上海Invitrogen公司合成。