《表1 耐药基因扩增引物序列信息》

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《IncFII-FIA-FIB型多重耐药质粒pBTR-CTXM的结构基因组学分析》

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依据p NDM-BTR质粒接合转移的实验方法[13]，将菌株BTR（四环素耐药，20μg/mL）作为供体菌，大肠杆菌EC600（利福平耐药，2.5 mg/mL）作为受体菌，迚行接合转移实验。混合37°C、220 r/min培养过夜的菌株BTR和受体菌EC600，5 000 r/min离心5 min后用80μL的BHI液体培养基重悬，点加在贴于BHI平板的滤膜（1 cm2大小，0.45μm孔径）上，37°C培养12-18 h。再用含2.5 mg/mL利福平和20μg/mL四环素的BHI液体培养基洗脱菌体，涂布于含有2.5 mg/mL利福平和20μg/mL四环素的BHI固体培养基上。37°C条件下培养24-48 h后，挑取单菌落，通过PCR（引物见表1）和一代测序检测菌株BTR相应的耐药基因是否存在于接合子（BTR-CTXM-EC600）中。