《表1 耐药基因引物扩增序列及退火温度》

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《耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药基因检测与分子流行病学研究》

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PCR法检测A类（KPC-2、GES）、B类（IMP、VIM、NDM-1）和D类OXA-48耐药基因。参照GeneBank中目的基因的标准序列及相关文献设计引物[3-4]。PCR反应体系为50μL，包括2×Taq Master Mix 25μL，上、下游引物各2μL，DNA模板2μL，灭菌蒸馏水19μL。PCR反应条件:94℃预变性4min，94℃变性1min，退火温度1min，72℃延伸1min，38个循环；最后72℃延伸10 min，见表1。扩增的产物经1.5%的琼脂糖凝胶中经110V电泳1h后，用凝胶成像系统观察结果并拍照分析。PCR产物经上海生工生物工程公司完成测序，结果用BLAST软件与Genbank上已公布的基因序列进行比对。