《表2 管家基因引物扩增序列及退火温度》

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《耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药基因检测与分子流行病学研究》


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根据MLST网站(http://bigsdb.pasteur.fr/klebsiella/primers_used.h-tml)提供的引物序列,扩增肺炎克雷伯菌的7个管家基因,包括gapA、infB、mdh、pgi、phoE、rpoB及tonB,引物序列及退火温度见表2。PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后拍照并送至上海生工生物工程公司测序。将测序所得到的结果在肺炎克雷伯菌MLST数据库官方网站(https://pubmlst.org/bigsdb?db=pubmlst_mlst_seqdef&set_id=13&page=sequ-enceQuery)中进行BLAST比对,得到每个管家基因的等位基因编号,和数据库中已有序列不能完全比对的,经再次PCR及测序后确认为新的等位基因型,将序列及测序文件递交至数据库以获得新的命名。将7个管家基因所得到的编号按照gapA-infB-mdh-pgi-phoE-rpoB-tonB组合,与MLST数据库中已有管家基因谱进行比对,得到每株细菌对应的ST型。