《表1 引物序列及扩增片段长度和退火温度》

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《三氧化二砷对膀胱癌T24细胞增殖及APC基因表达的影响》


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以As2O3终浓度分别为0、2、4、8μmol/L的培养液作用T24细胞72 h后收集细胞,提取总RNA,测定其浓度及A260/A280比值。选择A260/A280位于1.8~2.0之间的RNA进行c DNA合成。按RT-PCR试剂盒说明书进行PCR反应。APC及内参β-actin的引物序列及扩增片段大小见表1。扩增条件:95℃预变性2 min,95℃30 s、退火30 s、72℃45 s,35个循环后72℃延伸5 min。产物在1.5%琼脂糖凝胶中进行电泳,Tanon凝胶成像系统拍照并扫描条带光密度值(D),以β-actin为内参对照,mRNA表达强度以D目的基因/Dβ-actin比值表达。试验重复3次。