《表1 UCP2基因引物序列、退火温度及片段长度》

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《江口萝卜猪UCP2基因多态性与基因表达量及肉品质的相关性研究》

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参考NCBI上猪UCP2基因DNA参考序列（GenBank登录号:NC＿010451.4）和mRNA参考序列（GenBank登录号:NM＿214289.1）以及猪内参基因β-actin，设计5对引物用于扩增UCP2基因全部7个外显子，另外设计1对qPCR引物用于检测基因表达量，并送由上海生工生物工程有限公司合成。引物扩增片段长度及最适退火温度见表1。PCR反应体系（20μL）:2×Taq PCR Master Mix 10μL，DNA模板2μL，上、下游引物（10 pmol/μL）各2μL、dd H2O 4μL。PCR反应程序:95℃预变性5 min，95℃变性30 s，退火30 s，72℃延伸30 s，35个循环后再72℃终止延伸10 min。PCR产物用1%的琼脂糖凝胶电泳检查扩增效果。荧光定量PCR反应体系（10μL）:2×iTaq Universal SYBR Green Supermix 5μL，上、下游引物各0.5μL，cDNA模板1μL（将逆转录得到的cDNA稀释10倍），无RNA酶去离子水3μL。反应程序:95℃预变性3 min；95℃变性5 s，60.5℃退火30 s，72℃延伸30 s，共40个循环；延伸完成后采集荧光信号。循环结束后进行熔解曲线分析:95℃10 s，60℃15 s，然后以每5 s上升0.5℃的速率从60℃升高到95℃，每个样品做3个重复。