《表1 试验中所用引物：棉花GbSTK基因调控开花和黄萎病抗性的功能研究》

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《棉花GbSTK基因调控开花和黄萎病抗性的功能研究》

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下画线部分分别为Nde I、Pst I、Spe I和Asc I酶切位点。

采用水培法种植棉花不同抗、感品种，每2 d更换1次Hoagland营养液。待棉苗二叶一心时，将棉苗轻轻拿出，将根部浸泡在黄萎病菌孢子悬浮液（1×107 spores m L-1）中3 min，然后再将棉苗小心栽入上口直径6 cm的营养钵，并从营养钵的底部再次注射10 m L的黄萎病菌孢子悬浮液，以保证每棵棉苗成功接菌（附图1）。根据实验室前期构建的全长黄萎病菌诱导下c DNA文库中筛选的抗病相关基因的表达中发现，参与防卫反应的基因一般在抗/耐病品种较感病品种的表达高峰出现早或表达水平高，而前期我们对棉花STK受黄萎病菌诱导的荧光定量PCR显示，在接菌后8～12 h，其表达显著升高[15]，考虑到STK基因主要在参与信号转导方面起作用，其发挥作用一般在接菌后的早期阶段，因此本研究取接菌后12 h的根并提取其RNA，用于研究多个抗感品种中STK基因的表达。根据Gb STK基因序列设计实时定量引物STK-F2和STK-R2 （表1），片段大小为200 bp左右。根据Prime Script RT reagent Kit with g DNA Eraser （Perfect Real-time）反转录试剂盒合成c DNA。以棉花Gh UBQ14[17]为内参基因（表1），q RT-PCR反应体系为10.0μL，包含1.0μL c DNA、5.0μL 2×SYBR、0.5μL STK-F2 primer、0.5μL STK-R2 primer、2.8μL RNase-Free H2O、0.2μL ROX校正液。反应程序为94℃预变性30 s；95℃变性5 s，57℃退火5 s，72℃延伸34 s，40个循环。试验设置3个生物学重复，采用2–ΔΔCt方法[18]计算STK基因的相对表达量。