《表1 棉花黄萎病菌巢式PCR检测所用引物》

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《新疆棉田土壤黄萎病菌致病类型和微菌核定量分析》

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选用Perez-Artes等[17]和Mercodo-Blanco等[18]设计的落叶型黄萎病菌特异性引物D1/D2和INTD1/INTD2，及Mercado-Blanco等[19]设计的非落叶型黄萎病菌特异引物ND1/ND2和INTND1/INT-ND2，进行样本检测:以引物D1和D2、引物ND1和ND2作为双重巢氏PCR第1轮引物，PCR反应体系为20μL:2×PCR Mix 10μL，10μmol·L-1引物各0.5μL，10 mg·L-1模板1.0μL，ddH2O7μL；扩增产物的大小分别为539、1400 bp。再以引物INTD1和INTD2、引物INTND1和INTND2作为双重巢氏PCR第2轮引物，为了避免第2轮反应因扩增产物浓度过高导致凝胶电泳检测时发生拖带现象、影响实验效果，故降低第2轮PCR反应的引物和模板的终浓度，PCR反应体系为20μL:2×PCR Mix 10μL，10μmol·L-1引物各0.05μL，第1轮PCR产物0.5μL，dd H2O9.3μL；扩增产物的大小分别为462、824 bp。引物由安徽通用生物公司合成，所用引物序列见表1。