《表1 巢式PCR的引物序列》

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《多囊卵巢综合征患者卵巢颗粒细胞雄激素受体剪接变异体对内分泌激素水平的影响》

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利用TRIzol提取PCOS组患者的卵巢颗粒细胞RNA，去基因组DNA后反转录为cDNA。利用巢式PCR鉴定PCOS组患者卵巢颗粒细胞中的AR SV，引物序列见表1，扩增方案（图1）如下：（1）第一步PCR，采用位于第一外显子中的正向引物P1和第四外显子中的反向引物P4，扩增第二和第三外显子。（2）第二步PCR，以第一步PCR产物作为模板，采用位于第二外显子中的正向引物P2和第三外显子中的反向引物P3，扩增第二、三外显子的连接处。（3）第三步PCR，以第一步PCR产物作为模板，采用位于第二外显子与插入区域连接处的正向引物I2和插入区域与第三外显子连接处的反向引物I3，扩增插入区域。以上试剂均购买自宝日医生物技术（北京）有限公司，引物均由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。