《表1 定量PCR(qPCR)引物》

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《湛江湾沉积物中反硝化和厌氧氨氧化细菌的丰度、多样性及分布特征》

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DNA提取使用PowerSoil?DNA Isolation Kit提取试剂盒（MoBio公司，加拿大）从沉积物样品中提取总DNA，并通过NanoVueTM Plus微量分析仪（GE公司，英国）测定其DNA浓度。使用实时荧光定量PCR检测系统（CFX96 TouchTM，Bio-Rad公司，美国）进行定量PCR，定量PCR选择的特异性引物如表1所示。对于细胞色素cd1-亚硝酸盐还原酶（nirS）基因、Cu-亚硝酸盐还原酶（nirK）基因、一氧化二氮还原酶（nosZ）基因以及厌氧氨氧化的Ca.scalindua16SrRNA基因，总反应体系为20μL，包括SYBR Permix ExTaqM II（2×）（Takara，大连）10μL，正、反向引物各0.5μL（10μmol/L），1μL模板DNA，用双蒸馏水（ddH2O）补至20μL。各基因扩增程序如下:95°C，30s；95°C，5s；退火温度见表1，退火时间:30s；72°C，30s（nirS、Ca.scalindua16SrR NA基因延伸时间为60s）；共40个循环，添加溶解曲线（将温度从65°C提高至95°C，每5s提高0.5°C）。所有的DNA样品及标准质粒都设置三个平行。