《表1 qPCR的定量引物》

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《DH-332通过TRIM40/Raf-1/ERK1/2轴在胃癌中的作用和机制研究》

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收集DH-332处理48 h的MKN-45细胞、TRIM40-sh1/shN干扰细胞系的细胞，使用Trizol试剂提取细胞总RNA，用反转录试剂盒进行cDNA的反转。用反转录得到的cDNA为模板，β-actin作内参，通过qPCR检测不同样品中TRIM40、Raf-1、CyclinD1、CDK2、GLUT1、PKM2、HKII、LDHA mRNA的含量；同时，以1.2提取的DNA为模板，检测TRIM40 mRNA的含量。反应体系包括：cDNA/DNA 1μL，2×Ultra SYBR Mixture 10μL，上、下游引物各1μL，dd H2O7μL。反应条件为：预变性95℃10 min；95°C30 s；95°C5 s，60°C30 s，采集荧光，共40个循环；溶解曲线55～95°C，每次升高0.5°C。每个样品设置3个重复，结果用2-△△CT法计算。