《表1 用于qPCR的引物序列》

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《Emdogain对共培养成骨样细胞及内皮细胞成骨及成血管基因表达的影响》

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注:F—正义，R—反义

细胞分选后，使用实时荧光定量PCR仪检测MG63表面血管内皮细胞生长因子（VEGF）、碱性磷酸酶（ALP）、I型胶原蛋白（Col-1）基因表达水平，以及HUVEC表面VEGF酪氨酸激酶受体1（Flt-1）、VEGF酪氨酸激酶受体2（KDR）、von Willebrand因子（vWF）、内皮细胞C蛋白受体（EPCR）、E选择素（E-selectin）、促血管生成素2（Ang-2）基因表达水平。使用Trizol裂解液提取细胞总RNA。按照PrimeScript TM RT reagent Kit with gDNA Eraser试剂盒说明书操作，合成cDNA。使用SYBR Premix Ex Taq TM试剂盒，按说明书对骨生成相关基因及血管生成相关基因进行qPCR扩增。骨生成相关基因以β-actin为看家基因，血管生成相关基因以GAPDH为看家基因。引物序列见表1。扩增反应条件:DNA变性95℃、30 s，1个循环；扩增反应95℃、5 s、60℃、30 s共40个循环。基因相对表达水平的变化使用2-ΔΔCt法计算。其中ΔCt=Ct目的基因-Ct内参基因，ΔΔCt=ΔCt实验组-ΔCt对照组。