《表1 用于RT-qPCR的引物》

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《Sprague-Dawley大鼠肺发育中miR-431的连续表达研究》

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以U6为内参设计合成rno-miR-431引物序列（表1），rno-miR-431引物序列由上海捷瑞生物工程有限公司设计合成。提取E19、E21及P3组（每组6只胎鼠）右侧肺组织总RNA，利用变性琼脂糖凝胶电泳确保RNA完整性后进行逆转录，具体操作步骤按逆转录试剂盒（Epicentre，美国）说明书进行。获得cDNA后，按照PCR试剂盒（Arraystar，美国）操作说明，测定肺组织中rnomiR-431的表达。RT-qPCR反应体系（10μL）:SYBR Green/Florurscein qPCR Master Mix（2×）5μL，上下游引物（10μmol/L）各0.5μL，DEPC水2μL，cDNA 2μL。RT-qPCR反应条件:95℃10 min；95℃10 s，60℃60 s，40个循环；95℃10 s，60℃60 s，95℃15 s。反应结束后确认RT-qPCR扩增曲线及融解曲线，由计算机自动计算定量结果Ct值，实验独立重复3次，每次每个样本设3个复孔，取其平均值。采用△△CT法来计算所测目的基因rno-miR-431的相对表达量，计算公式:△△CT=[CT（待测样本目的基因）-CT（待测样本内参）]-[CT（对照样本目的基因）-CT（对照样本内参）]，相对表达量=2-△△CT。