《表1 RT-qPCR使用的引物》

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《表没食子儿茶素没食子酸酯促进急性髓系白血病细胞凋亡的机制》

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1×105KG-1、THP-1细胞接种到12孔板，用25、50、75、100、150μg/mL EGCG处理48 h，设空白对照组。1200 r/min离心5 min收集细胞，冰冷PBS洗涤，应用TRIzol试剂（Takara）提取总RNA，离心样品加入氯仿，转移上清并加入预冷异丙醇。16 000 r/min离心10 min，弃上清加入冰冷乙醇清洗2次，离心后小心吸弃上清，产物以焦碳酸二乙酯水溶解。RNA定量采用NanoDrop微量分光光度计。取1μg RNA用于合成cDNA，按PrimeScript RT Reagent Kit with gDNA Eraser(Takara）操作说明进行。qPCR按照SYBR Green qPCR Master Mix(Thermo）操作说明进行，所用引物见表1。扩增循环数设为40个，变性温度设为95℃，时间30 s，各基因退火温度见表2，时间为30 s，延伸温度和时间分别为72℃，30 s。相对mRNA表达水平采用2-ΔΔCt计算，β-actin作为参照基因。所有实验均重复至少3次。