《表1 RT-qPCR验证使用的引物信息》

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《意大利蜜蜂响应东方蜜蜂微孢子虫胁迫的免疫应答》

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为了验证全转录组测序数据的可靠性，随机选取6个DEG（TCONS＿00035591、TCONS＿00021864、XM＿006569665.2、TCONS＿00030754、XM＿003251768.3和XM＿016912533.1）进行RT-q PCR验证。参照郭睿等[21]的方法，利用DNAMAN软件根据所选DEG的碱基序列设计相应的特异性引物，委托上海生工生物工程有限公司进行合成，相关引物信息详见表1。利用RNA抽提试剂盒（Ta Ka Ra公司，中国）分别提取Am7CK、Am7T、Am10CK和Am10T样品的总RNA，以Oligo (dT）23作为引物进行反转录，得到对应的c DNA，作为DEG和内参基因actin的qPCR模板。反应体系（20μL）包含上下游向引物（10.0μmol·L-1）各1μL，c DNA模板DNA 1μL，SYBR Green Dye 10μL，DEPC水7μL。反应在QuantStudio荧光定量PCR仪（ThermoFisher公司，美国）上进行，按照SYBR Green Dye试剂盒（Vazyme公司，中国）操作说明书上的方法，每个反应进行3次重复。反应条件：95℃预变性1 min，95℃变性15 s，60℃退火30 s，共40个循环，最后72℃延伸45 s。利用2-ΔΔCt法对上述DEG的相对表达量进行计算。通过GraphPad Prism软件进行相关数据分析及绘图。