《表1 RT-qPCR引物信息》

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《微小RNA及其介导的竞争性内源RNA调控网络在意大利蜜蜂工蜂中肠发育过程中的潜在作用》

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参考前期已建立的方法[19，23-24]，通过Stem-loop RT-q PCR检测4个随机挑选的DEmiRNA(mi R-210-z、mi R-342-y、miR-7975-y和mi R-155-x）在Am7和Am10中的表达情况，以验证数据的可靠性。通过DNAMAN软件设计特异性引物和通用反向引物，委托上海生工生物工程有限公司合成引物，引物信息详见表1。以sn RNA U6作为内参，使用M5 microRNA抽提试剂盒（Mei5bio公司，中国）分别提取Am7和Am10的mi RNA作为模板，利用Stem-loop引物进行反转录得到相应的c DNA后，以c DNA作为模板进行q PCR。qPCR反应按照SYBR Green Dye试剂盒（Vazyme公司，中国）操作说明书进行。反应体系20μL包含SYBR Green Dye 10μL，c DNA模板1.3μL，正、反向引物各1μL，DEPC水6.7μL。qRT-PCR反应在ABI QuantStudio 3荧光定量PCR仪（ABI，美国）上进行，程序设置为95℃预变性5 min；95℃变性10 s，60℃退火延伸30 s，共40个循环。每个反应进行3次生物学重复和技术重复。利用2-ΔΔCt法计算miRNA相对表达量。利用Graph Prism 7软件处理数据和绘图，通过t检验计算组间显著性。