《表1 RT-qPCR引物》

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《沙福芽孢杆菌氧化磷酸化通路相关基因对锰胁迫的应答》

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以沙福芽孢杆菌（Bacillus safensis KTCC）的全基因组序列为模板，设计5个基因的特异性引物（表1）。提取细菌总RNA，反转录成cDNA，经PCR扩增得到目的基因片段，连接pGEM-T Easy载体，转化感受态大肠杆菌DH5α，于50 mg/L氨苄青霉素的固体LB平板筛选阳性克隆，提取测序正确的克隆菌株质粒，以10倍梯度稀释作为DNA模板，绘制标准曲线，计算扩增效率。RT-qPCR的扩增程序:95℃预变性，15 min；95℃变性，10 s；63℃，30s；40个循环数；溶解曲线的设置为95℃，15 s，55℃，15 s，95℃，0.5 s。以16S r RNA为内参基因[24]，采用2-ΔΔCt方法[25]计算基因的相对表达量。为减少样品之间的误差，每个样品重复测定3次。