《表1 RT-qPCR引物信息》

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《微量元素锌对牛卵母细胞体外成熟及其体外受精胚胎发育的影响》

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根据NCBI上已公布的引物序列，使用引物设计软件Primer 5.0进行引物设计并交由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，引物见表1。分别以卵丘细胞和卵母细胞的cDNA为模板，β-actin为内参，使用相对定量的方法对基因表达的情况进行分析。反应体系为20μL:SYBR Premix Ex TaqⅡ10μL，ROXⅡ0.4μL，上、下游引物（10 nmol/L）各0.3μL，模板cDNA 1μL，RNA-free H2O 8μL。反应程序:95℃，10 min；95℃，30 s；55℃，1 min，共40个循环。每次检测重复3次，并根据2-ΔΔCt法计算相关基因的表达差异。