《表1 RT-qPCR引物模板》

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《CD44相关亚型在裸鼠原位胃癌生长转移中的表达变化及机制》

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收集后的CTC行单细胞RT-qPCR，检测CTCCD44各亚型（CD44s、CD44v3、CD44v6、CD44v9）表达差异。Single cell-to-Ct试剂盒提取3个细胞的总RNA，反转录合成cDNA，并以CD44各亚型及甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）对应引物进行预扩增。预扩增后产物2μL加入25μL含对应引物的SsoAdvanced SYBR绿色荧光超级混合液进行qPCR，采用SYBR绿色荧光标记法检测PCR产物。检测各基因表达水平，以GAPDH为内参照。RT-qPCR结果采用仪器自带软件分析，根据标准曲线计算基因拷贝数。记录各实验组荧光信号到达所设定的阈值时所经历的循环数即Ct值，以GAPDH为内参，计算目的mRNA的相对表达量（2-ΔΔCt）。所有引物序列由上海生工生物工程有限公司合成，引物的设计根据GenBank的基因序列、用Primer5.0软件设计，引物序列见表1。