《表1 RT-qPCR引物序列》

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《FoxO3基因与膀胱癌临床病理特征及预后的相关性》

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Notes:F:forward；R:reverse；RT-qPCR:reverse transcription quantitative polymerase chain reaction

提取肿瘤及癌旁正常组织中总RNA。总RNA提取试剂盒购买于北京天恩泽基因科技公司，反转录试剂盒购自杭州博日科技有限公司，操作步骤严格按照试剂盒说明。使用紫外分光光度计检测提取后的各RNA样本的OD260/280值，并计算RNA浓度，置-80℃保存备用。实时荧光定量PCR（real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR）方法测定样品中FoxO3 mRNA的含量。根据Genbank数据库公开的基因及mi R BASE数据库中的基因序列，使用Primer5.0引物设计软件，通过上海生工公司合成引物。引物序列见表1。PCR试剂盒购自美国Bio-Rad公司，RT-qPCR仪器使用德国ABI公司7500型定量PCR仪。RT-qPCR反应程序如下:95℃预变性30 s，然后按以下条件循环40次:变性95℃5 s，退火/延伸30 s。检测结果以β-actin为内参照，将目标基因的Ct值与β-actin的Ct值作对比，计算各目的基因mRNA的相对表达量，ΔCt目标=Ct目标-Ctβ-actin，ΔΔCt=ΔCt实验组–ΔCt对照组，以2-ΔΔCt表示两组目标基因表达量的比值[22]。