《表1 RT-qPCR引物序列》

《表1 RT-qPCR引物序列》   提示:宽带有限、当前游客访问压缩模式
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《少腹逐瘀汤对子宫内膜异位症大鼠MAPK/ERK信号通路的影响》


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取大鼠子宫组织约100 mg,液氮研磨后,加TRIzol、氯仿、异丙醇等提取总RNA。取1μL提取的RNA经超微量分光光度计检测A260/A280的比值在1.8~2.0,提示RNA质量较好。总RNA用gDNA Eraser处理后,采用逆转录试剂盒将纯化的RNA逆转录合成cDNA。以cDNA作为模板进行q PCR扩增。实时荧光定量PCR采用TaKaRa的SYBR Premix Ex TaqⅡ试剂盒,在Mx3000P实时荧光定量PCR仪(Agilent)上进行,分别扩增ERK、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)和内参照GAPDH(引物序列见表1)。每个反应设3个重复。反应条件为:预变性95℃10min,1个循环;95℃15 s、60℃15 s、72℃30 s,40循环。扩增结束后确认扩增曲线和熔解曲线,确认得出数据的可信性。采用2-ΔΔCt计算m RNA的相对表达量。