《表1 RT-qPCR引物信息》

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《蜜蜂球囊菌菌丝和孢子的比较转录组分析》

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随机选取6个DEG(5个上调基因和1个下调基因）进行RT-qPCR验证．其中，上调基因分别为：铁载体转运蛋白酶编码基因（KZZ91599.1）、核糖体生物发生蛋白酶编码基因（KZZ88689.1）、核糖体生物合成ATP酶RIX7编码基因（KZZ97232.1）、ABC转运体编码基因（KZZ88904.1）和Fe3+ABC转运蛋白底物结合蛋白编码基因（KZZ89047.1）；下调基因为：铁载体转录因子SreA酶编码基因（KZZ89485.1）．根据所选DEG的序列信息，利用Primer Primer 6软件设计特异性的上游（F）引物和下游（R）引物，委托上海生物工程有限公司进行引物合成．选择球囊菌5.8srRNA基因（GenBank:U68313.1）作为内参．利用RNA抽提试剂盒（天漠生物，中国）分别提取孢子和菌丝的总RNA，利用oligo(dT）引物进行反转录得到相应的cDNA，作为模板进行RT-qPCR.RT-qPCR反应体系（20μL）包含：SYBR Green Dye 10μL，F引物1μL，R引物1μL，DNA模板1μL，DEPC水补至20μL．进行PCR扩增，反应条件：95℃1min，95℃15s，55℃60s，共40个循环，溶解曲线默认系统程序．采用2-△△Ct法计算DEG在AaM vs AaS比较组的相对表达量．每个反应进行3次生物学重复和3次技术重复．最后利用GraphPad Prism 7软件进行qPCR结果的检验及绘图．本研究使用的引物序列信息详见表1.