《表2 所用RT-qPCR和RNAi的引物信息》

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《飞蝗核受体基因LmE75的分子特性和功能分析》

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T7序列

提取上述组织与发育时间的样品总RNA，具体步骤均按照RNAisoTM Plus（Ta Ka Ra）试剂说明书操作，用1.5%的琼脂糖凝胶电泳检测所提取RNA的质量，利用NanoDrop 2000定量各样品的RNA浓度，并检验A260/A280和A260/A230的值。以1μg总RNA为模板，根据Reverse Transcriptase M-MLV(RNase H-）(Ta Ka Ra）反转录试剂盒说明书，合成c DNA。运用Primer 3.0软件设计3个LmE75亚型的特异性表达引物，以β-actin作为内参[18-19]，引物信息见表2。利用RT-q PCR方法检测LmE75A、LmE75B和LmE75C在不同组织和发育时间的表达特性。在Applied Biosystems 7300 real-time PCR system上进行RT-q PCR，PCR反应体系按照SYBR?Green real-time PCR Master Mix(Ta Ka Ra）说明书进行配置，扩增程序第一步为预变性10 min，第二阶段为95℃15 s，退火温度60℃1 min，40个循环；DNA熔解曲线为65—95℃，每步上升1℃。每个样品均设置3个生物学重复和2个技术重复，基因相对表达量采用2-ΔCt法[20]进行分析，每个组织与发育时间点的数据以平均数±标准差表示。采用SPSS中的Tukey’s HSD进行差异显著性检验，柱形图上不同字母代表基因表达差异显著。