《表1 各RT-PCR、荧光定量RT-PCR及RNAi反应所用引物》

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《棉铃虫中肠特异性结合蛋白ABCC1对Cry1Ac毒力的影响》

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利用Primer 5.0软件分别设计ABCC1两个跨膜区（TMD）携带酶切位点Eco RV和HindⅢ的引物（表1），名称分别为TM1-Eco RV-F、TM1-Hind III-R；TM2-Eco RV-F、TM2-Hind III-R。把PCR合成的目的基因转入克隆载体，取测序正确的质粒和表达载体pET32a进行双酶切，用T4-DNA连接酶将目的片段和表达载体构建为重组质粒。将测序正确的重组质粒转入BL21（DE3）感受态细胞中并转接500 mL LB培养基中培养，加入0.8 mmol·L-1 IPTG并在25℃过夜诱导表达。高速低温离心收集菌体并超声破碎，经SDS-PAGE电泳并切取目的片段送至北京华大蛋白质研发中心进行质谱检测。并用购于生工生物工程有限公司的PAGE胶蛋白微量回收试剂盒回收目的蛋白。