《表2 RT-qPCR引物信息》

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《c-myb基因启动子表观遗传修饰对该基因表达的影响》


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按照Trizol试剂说明书提取细胞RNA。用IDT网站(http://sg.idtdna.com/pages)设计小鼠c-myb基因和gapdh内参的引物。将提取的RNA按照Ta KaRa公司反转录试剂盒说明书进行反转录,实时荧光定量RT-qPCR按照每个样品3次重复进行实验(表2),25μL反应体系:SYBR Green 12.5μL,cDNA 2μL,上下引物共2μL,去离子水8.5μL,瞬间离心后放入罗氏荧光定量PCR480仪器中,选择程序为95℃,10 min;之后95℃20 s,60℃20 s,72℃30 s,共40个循环,最后72℃,10 min。基因表达量用相对定量方法(2-ΔΔCT)计算。