《表2 用于RT-qPCR的引物序列》

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《猪Hsp40基因过表达与干扰重组慢病毒载体的构建》

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根据猪DNAJC7（Hsp40）基因的编码序列（Accession No.XM_003131409.5）设计1对特异性引物用于猪Hsp40基因的克隆，引物序列如下:Hsp40-F:5′-CGGAATTCATGGCGGCTGCCGCGGAGTGC-GATG-3′（下划线为Eco RⅠ酶切位点）；Hsp40-R:5′-CGGGATCCTTAGCCAAACTGGAAAAAGAAA-TTC-3′（下划线为Bam HⅠ酶切位点）。待克隆出猪Hsp40基因编码序列后，参照Thermo Fisher Scientific公司的shRNA在线设计软件（https://rnaidesigner.t hermofisher.com/rnaiexpress/）设计4个针对猪Hsp40基因的RNA干扰序列和1个阴性对照序列，同时参照文献[24]合成1对引物U6-F:5′-TTCTTG-GGTAGTTTGCAGTT-3′，U6-R:5′-CGGAGCCAG-TACACGACA-3′，用于各慢病毒干扰载体的PCR鉴定，详见表1。为了RT-qPCR试验需要，设计1对扩增猪Hsp40基因的定量引物，同时参照文献[24]合成内参β-actin的实时荧光定量PCR引物，详见表2。引物合成由北京六合华大基因科技有限公司完成。