《表2 RT-qPCR的引物序列》

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《氟砷联合染毒对成骨与破骨细胞共培养体系中TRAF-6/NF-κB1/NFATc1/TRAP mRNA表达的影响》

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采用Trizol试剂提取共培养体系中的细胞总RNA，在紫外分光光度计定量RNA的浓度和纯度，保证D260/D280比值在1.8～2.1。按反转录试剂盒说明书合成cDNA。实时荧光定量PCR（RT-q PCR）检测TRAF-6、NF-κB1、NFATc1和TRAP mRNA的表达，GAPDH为内参基因。引物由艾瑞达生物科技公司设计（表2）。RT-q PCR反应体系:SYBR?Premix Ex TaqTMⅡ5μL，上、下游引物各0.5μL，cDNA模板1μL，ddH2O补足至10μL，每个样本设置3个复孔。反应条件:95℃预变性30 s，95℃变性5 s，58℃退火30 s，72℃延伸30 s，共39个循环。采用RT-qPCR仪自动生成循环值（Ct），将原始数据（Ct）换算为基因的相对表达量（2-△△Ct）值，进行统计分析。