《表1 巢式PCR检测HBV基因型的引物》

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《不同HBV基因型慢性乙型肝炎患者的血清HBV DNA、PreS1、HBeAg检测结果分析》

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先按照病毒基因组DNA提取试剂盒说明书操作流程，提取患者血液标本中的乙型肝炎病毒DNA基因组；然后采用巢式PCR技术进行两轮扩增及检测，引物设计如表1。第一轮PCR扩增之引物针对HBV保守序列设计，扩增程序为：94℃预变性2 min，94℃变性30 s，58℃退火30s，72℃延伸2.5 min，进行30个循环，最后72℃延伸10 min。第二轮PCR扩增之引物针对人群中HBV主要类型（B、C亚型）特异基因序列设计，扩增程序为：94℃预变性2 min，94℃变性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸1 min，进行35个循环，最后72℃延伸10min。PCR扩增产物进行2%琼脂糖凝胶电泳分析，50 bp DNA分子量标准作为为电泳参照。