《表1 巢式PCR扩增隐孢子虫引物》

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《云南省树鼩隐孢子虫和毕氏肠微孢子虫分子流行病学调查研究》

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基于小亚基核糖体RNA（18S r RNA）基因对树鼩粪便样品进行隐孢子虫分子生物学检测，引物及扩增条件参照Xiao等[24]，引物序列详见表1。PCR反应体系为25L:dd H2O 15.75L，10×buffer(Mg2+free） 2.5L，d NTP（2.5 mmol/L each） 2L，Mg Cl2（25 mmol/L） 2L，Ex Taq（5 U/L）0.25L，第一轮上、下游引物（18S F1+18S R1，序列见表1）各0.25L，模板DNA2.0L；第二轮PCR反应，所用模板为第一轮PCR产物，所有引物为第二轮上、下游引物（18S F2+18S R2），其余试剂和用量同上不变。PCR反应条件为：94℃预变性5 min；94℃变性45 s，56℃（18S F1+18S R1）退火45 s或58℃（18S F2+18S R2）退火45 s，72℃延伸1 min，35个循环；72℃再延伸10 min。取5L的反应产物在1.0%的琼脂糖凝胶上电泳，目的条带大小为830 bp，选阳性样品进行测序。