《表5 饮用水中贾第鞭毛虫和隐孢子虫的数字PCR法的加标回收实验结果（n=3)》

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《饮用水中贾第鞭毛虫和隐孢子虫的数字PCR测定法》

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注：贾第鞭毛虫基因片段含16 copies/个，隐孢子虫基因片段含20copies/个。

向100 L蒸馏水中加入2～3个贾第鞭毛虫和隐孢子虫进行加标回收实验，重复3次，结果见表5。贾第鞭毛虫DNA总拷贝数均值为8.688，即0.543个贾第鞭毛虫；该方法的加标回收率为27.15%，RSD为12.81%。隐孢子虫的DNA总拷贝数可达到15.378，即0.769个隐孢子虫；该方法的加标回收率为25.63%，RSD为15.35%。由于贾第鞭毛虫和隐孢子虫标准品只有单拷贝浓度水平，稀释20倍到2～3个卵囊（孢囊）于100 L水的过程控制很难稳定达到2个/100 L；另外水样富集、膜溶解、DNA提取效率等原因，数字PCR个体结果也存在一定的差异。但是从加标回收率来看，数字PCR检测结果远高于《生活饮用水标准检验方法》（GB/T 5750.12—2006）中回收率至10%以上的要求。因此，本研究研发的过滤富集-膜溶解-提取DNA-数字PCR法可用于生活饮用水中贾第鞭毛虫和隐孢子虫的检测，并且大大提高了方法的灵敏性。