《表2 巢式PCR扩增毕氏肠微孢子虫引物》

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《云南省树鼩隐孢子虫和毕氏肠微孢子虫分子流行病学调查研究》

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基于核糖体RNA基因的内部转录间隔区（ITS），对样品进行毕氏肠微孢子虫分子生物学检测，引物及扩增条件参照Karim等[25]；引物序列详见表2。PCR反应体系为25L:dd H2O 15.375L，10×buffer（Mg2+free） 2.5L，d NTP（2.5 mmol/L each）2L，Mg Cl2（25 mmol/L） 2L，Ex-Taq（5 U/L）0.125L，第一轮上、下游引物（NEBF1+NEBR1）各1L，模板DNA 1L；第二轮PCR反应除所用模板为第一轮PCR产物外，引物为第二轮上、下游引物（NEBF2+NEBR2）外，其余试剂和用量不变。PCR反应条件为：94℃预变性5 min；94℃变性45 s，55℃退火45 s，72℃延伸1 min，35个循环；72℃再延伸10 min。取5L的反应产物于2.0%的琼脂糖凝胶电泳，目的条带的大小为392 bp，选阳性样品进行测序。