《表1 巢式PCR检测疟原虫种类的引物》

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《荧光定量PCR在疟疾实验室诊断中的应用》


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提取的抗凝全血DNA进行疟原虫巢式PCR扩增,疟原虫18S r RNA基因引物序列由上海生工生物工程有限公司合成,引物序列见表1。PCR反应体系(50μl):2×PCR预混液25μl,上、下游引物各1.5μl,模板DNA(50 ng/μl)5μl,ddH2O补至50μl(第1轮)。反应条件:94℃3 min;94℃30 s,58℃30 s,72℃60 s,35个循环。72℃延伸5 min。取第1轮扩增产物2μl作为第2轮PCR扩增的模板DNA,反应体系和反应程序同第1轮。最终的扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳后,于凝胶成像系统中观察结果,每份血样的检测均由双人分别重复检测两次。