《表1 SVCV PCR检测所用引物》

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《一株鲈鲤源鲤春病毒血症病毒的分离鉴定及其病理观察》

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按照RNAiso说明书的步骤对有明显临床症状的自然发病鱼、人工感染发病鱼内脏组织和细胞培养病毒液进行总RNA的提取，然后按照PrimeScript 1st Strand cDNA Synthesis Kit产品说明书以总RNA为模板合成cDNA。参考OIE推荐的半巢式PCR法[13]，合成两对引物（表1）扩增SVCV糖蛋白基因，F1/R2扩增该基因中的714 bp片段，F1/R4则从该片段中再扩增606 bp片段，引物由上海生物工程有限公司合成。PCR反应体系为25μL:cDNA 2μL，Mix-reaction buffer 12.5μL上下游引物各1μL，ddH2O 8.5μL，PCR反应条件参照OIE诊断手册[13]。1%琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物大小，产物纯化后送上海生物工程有限公司测序，将测序结果上传NCBI与GenBank中已知核酸序列进行Blast比对，获得的序列采用DNAstar进行多序列比对分析，并用MEGA6.0构建系统发育进化树。