《表1 实验所用引物：小麦与叶锈菌互作过程中精氨酸脱羧酶基因TaADC的功能研究》

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《小麦与叶锈菌互作过程中精氨酸脱羧酶基因TaADC的功能研究》

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下划线序列是酶切位点；TaADC：小麦精氨酸脱羧酶；GAPDH：甘油醛-3-磷酸脱氢酶；VIGS：病毒诱导的基因沉默

Tc Lr26和Tc幼苗生长至第7天时，在第1片真叶的正面均匀接种叶锈菌生理小种260。接种后0、8、16、24、48及72 h分别取第1片叶0.03 g，于液氮速冻后提取RNA。根据Ta ADC（Gen Bank No.ABX80379.1)序列，利用Primer Premier 5设计特异性实时荧光定量PCR引物（表1），交由生工生物公司（上海）合成。采用SYBR?Premix Ex Taq TMⅡ（Ta‐Ka Ra，大连）试剂盒进行PCR反应。PCR反应体系（10μL）:SYBR（2×）5μL、200 g/μL c DNA模板2μL、10μmol/L上下游引物各0.2μL、灭菌dd H2O 2.6μL。PCR反应程序：95℃30 s；95℃5 s，55℃15 s，72℃10 s，40个循环。以小麦甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）为内参基因。每个样品设置3次重复。利用2-ΔΔCt法计算相对表达量。