《表2 研究所用引物：亚热带山区土壤未培养微生物L-赖氨酸脱羧酶Ldc1E中关键氨基酸残基的功能鉴定》

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《亚热带山区土壤未培养微生物L-赖氨酸脱羧酶Ldc1E中关键氨基酸残基的功能鉴定》

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本研究所用PCR引物均由上海生物工程有限公司合成，根据定点突变试剂盒原理设计L-赖氨酸脱羧酶定点突变引物信息如下（表2）。以40 ng/μL pET-30a（+）/ldc1E重组质粒作为PCR模板，添加10μmol/L引物，各1.5μL，5×TranStart FastPfu Buffer10μL，2.5 mmol/L d NTPs 4μL，TranStart FastPfu DNA polymerase 1.5μL，加无菌水至总体积50μL作为PCR反应体系。PCR反应条件设置为：95℃预变性2 min；95℃变性20 s，55℃～68℃退火30 s，72℃延伸3 min 20 s，共30个循环；72℃再延伸5 min。扩增得到的DNA片段进行1%琼脂糖凝胶电泳检测，添加1μL的DMT酶消化以降解PCR产物中模板质粒，转化到DMT感受态细胞中，构建突变体文库送生物公司测序。