《表1 本研究所用引物:西瓜XBCl3家族的鉴定与抗病功能分析》
采用RNA Isolater Reagent试剂盒(Vazyme Biotech,南京)提取植物总RNA。用HiScript Q RT SuperMix for qPCR(+gDNA wiper)试剂盒(Vazyme Biotech,南京)处理除去基因组DNA污染,并反转录合成c DNA,用于基因扩增和表达分析。q PCR采用Ace Q qPCR SYBR Green Master Mix试剂盒(Vazyme Biotech,南京)在CFX96 Real-time System(Bio-Rad,Hercules,CA,USA)上进行,20μL反应体系含各0.5μL正向和反向引物(表1,10μmol·L-1)、0.5μL c DNA、10μL AceQ SYBR Green Master Mix、8.5μL ddH2O。反应条件为95°C 5 min,95°C 10 s、60°C 30 s、72°C 30 s,共38个循环。qPCR结果采用2-ΔΔCT方法计算(Livak和Schmittgen 2001)。以西瓜ClGAPDH或拟南芥AtActin基因为内参,以ClGAPDH或AtActin表达量的倍数来表示目的基因的相对表达水平。
图表编号 | XD0099410500 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2019.08.20 |
作者 | 申志慧、黄子凌、肖琪、李大勇、宋凤鸣 |
绘制单位 | 浙江大学生物技术研究所农业部作物病虫分子生物学重点开放实验室、浙江大学生物技术研究所农业部作物病虫分子生物学重点开放实验室、浙江大学生物技术研究所农业部作物病虫分子生物学重点开放实验室、浙江大学生物技术研究所农业部作物病虫分子生物学重点开放实验室、浙江大学生物技术研究所农业部作物病虫分子生物学重点开放实验室 |
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