《表1 引物信息:小麦与叶锈菌互作过程中TabZIP3的功能研究》

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《小麦与叶锈菌互作过程中TabZIP3的功能研究》


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TabZIP3:小麦碱性亮氨酸拉链转录因子3;V1:TabZIP3基因沉默片段;GAPDH:甘油醛-3-磷酸脱氢酶;下划线指示NotⅠ酶切位点

在7日龄Tc Lr26、Tc幼苗第一片真叶上分别接种叶锈菌生理小种260,在接种后0、4、8、12、16、24和48 h取接种叶片,提取RNA并反转录合成cD-NA。利用Primer Premier 5.0在TabZIP3的非保守区设计特异性引物(表1),以不同接种时间点材料的cDNA为模板进行qRT-PCR。反应体系为:SYBR?Premix Ex TaqTMⅡ5μL,ddH2O 3.6μL,10μmol/L上下游引物各0.2μL,10 ng/μL cDNA模板2μL。反应程序为:95℃预变性300 s;95℃变性10 s,57℃退火20 s,72℃延伸15 s,40个循环。设置3次技术重复。以小麦GAPDH为内参基因(GenBank No.MH790259),使用2-ΔΔCt法计算基因的相对表达量。