《表1 克隆全长引物：马铃薯双精氨酸转运系统基因TatA和TatB克隆及功能分析》

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《马铃薯双精氨酸转运系统基因TatA和TatB克隆及功能分析》

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根据同源序列比对马铃薯EST数据库得到的全基因序列信息，应用软件Primer Premier 5设计3&apos；、5&apos；端片段克隆引物（表1）。以马铃薯c DNA文库为模板，利用北京全式金生物技术有限公司的Trans Taq DNA Polymerase High Fidelity扩增目的基因，反应体系50.0μL包括Template Variable，10μmol/L Forward Primer 1.0μL，10μmol/L Reverse Primer 1.0μL，10×Trans Taq Hi Fi BufferⅡ5.0μL，2.5 mmol/L d NTPs4.0μL，Trans Taq Hi Fi DNA Polymerase 1.0μL。利用琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒对目标片段进行割胶纯化，方法参照说明书。采用北京全式金生物技术有限公司的p EASY-Uni Seamless Cloning and Assembly Kit将St Tat A、St Tat B连接到表达载体p35Sn YFP中，转化采用大肠杆菌Top10感受态，复苏和涂板。筛选阳性菌落测序。用生物信息学软件对测序结果进行同源性分析。