《表1 实验所需引物：淡水贝类：三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)Dmrta2-1基因全长cDNA的克隆与表达分析》

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《淡水贝类：三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)Dmrta2-1基因全长cDNA的克隆与表达分析》

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基于实验室已构建的三角帆蚌珍珠囊转录组数据库，筛选Hc Dmrta2-1基因来，通过Primer Premier5.0软件设计引物（表1），由生工（上海）合成。通过验证已知序列，所得结果在NCBI比对准确后，设计5'和3'RACE引物（表1），使用SMARTerTMRACE c DNA Amplification Kit （Clontech，美国），按照操作说明书进行5'和3'扩增。PCR扩增体系为20μL，反应程序为：94℃5 min （预变性），94℃30 s （变性），55℃30 s（退火），72℃2 min （延伸国），35个循环（变性-延伸），最后72℃10 min （复延伸），4℃保存。将扩增产物用1%Agarose M进行凝胶电泳检测、胶纯化，与p CEM-T Easy载体（Promega，美国）连接，转入E.coli感受态细胞培养（过夜）。挑选阳性克隆进行菌液PCR检测，筛选出与目标基因大小一致且条带清晰单一的菌液，送至生工（上海）测序，将结果去载体后在Blastx进行比对拼接，从而获得Hc Dmrta2-1的c D-NA序列全长。通过与其它物种Dmrta2氨基酸序列同源性比对分析，构建氨基酸多重序列比对分析图和系统发育树分析序列结构和物种间亲缘关系。