《表1 引物序列：三角帆蚌Dmrta2-2基因的鉴定与表达分析》

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《三角帆蚌Dmrta2-2基因的鉴定与表达分析》

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所选基因来自本实验室已有的三角帆蚌转录组库，根据基因保守序列设计实验所需引物（表1），发送至生工生物（上海）技术有限公司合成。通过验证已知序列正确性，设计5'和3'引物（表1），采用SMA-RTerTMRACE c DNA Amplification试剂盒（Clontech，美国）进行5'和3'扩增，反应程序如下：94℃预变性5 min，94℃变性30 s，55℃（Tm值）退火30 s，72℃延伸2 min （1 min/1 000 bp），变性-延伸阶段循环35次，最后72℃复延伸10 min。将所得产物通过琼脂糖凝胶电泳检测，接着分离、纯化、连接、克隆并测序（生工生物(上海）技术有限公司)，将3'与5'端序列拼接获得Hc Dmrta2-2基因全长序列，通过同源性序列比对分析，构建系统进化树。